Avanços no Diagnóstico da Tuberculose: Testes Portáteis, Detecção Ultrassensível de DNA e Kits Rápidos de Resistência a Medicamentos

Três desenvolvimentos recentes no diagnóstico da tuberculose estão ampliando a capacidade de detectar a doença de forma mais rápida, precisa e em locais onde o teste tradicionalmente tem sido difícil ou indisponível.

Um estudo publicado no New England Journal of Medicine relatou que um dispositivo portátil chamado MiniDock MTB fornece resultados de qualidade laboratorial em menos de trinta minutos, utilizando amostra de escarro ou um simples swab de língua. Pesquisadores da UC San Francisco, UC Irvine e da Makerere University College of Health Sciences, em Uganda, inscreveram quase 1.400 pacientes em sete países da África e da Ásia. O teste atingiu as metas de precisão da Organização Mundial da Saúde e mostrou-se fácil o suficiente para que profissionais de saúde aprendessem o procedimento apenas com as instruções impressas. O dispositivo funciona a bateria e custa cerca de US$ 300, com cada teste custando de US$ 3 a US$ 4. Ele utiliza tecnologia molecular para detectar DNA do Mycobacterium tuberculosis. Para pacientes que não conseguem produzir escarro — incluindo crianças, idosos e pessoas vivendo com HIV — a opção do swab de língua é transformadora. Em março, a Organização Mundial da Saúde emitiu sua primeira recomendação formal para testes de amplificação de ácido nucleico próximos ao ponto de atendimento, juntamente com orientações sobre amostras de swab de língua e uma estratégia de pooling de escarro. O teste tem melhor desempenho em pacientes com infecções estabelecidas e pode não detectar casos iniciais com baixa carga bacteriana. Ele também não consegue distinguir a TB comum das cepas resistentes a medicamentos, sendo necessário um teste complementar para orientar o tratamento.

Separadamente, pesquisadores do Postgraduate Institute of Medical Education and Research, Chandigarh; do National Institute of Tuberculosis and Respiratory Diseases, Nova Déli; e outros desenvolveram um kit Quick DNA que reduz significativamente o tempo necessário para testar a tuberculose multirresistente. No centro deste avanço diagnóstico está o Trans-Filter, uma membrana projetada para filtrar as bactérias da TB e transformar amostras biológicas perigosas em dados seguros e transportáveis. Os pesquisadores triaram mais de 1.800 pacientes para testar o novo sistema. O processo começa com uma amostra de escarro do paciente, que é liquefeita e passada pelo dispositivo Trans-Filter. Os filtros são esterilizados e secos ao ar, fixando o DNA bacteriano no papel de filtro. Durante os testes, as membranas foram armazenadas em temperaturas de até 50°C por até quatro semanas, com o DNA bacteriano permanecendo preservado. Quando o filtro chega a um laboratório central, o kit Quick DNA utiliza lise térmica — aquecimento do filtro em uma solução tampão a 80°C por cinco minutos — para liberar o DNA bacteriano, que é então analisado usando um ensaio de sonda em linha (Line Probe Assay) para detectar mutações que indicam resistência a antibióticos como rifampicina ou isoniazida. O kit reduz a extração de DNA de um processo de sete etapas que levava quase uma hora para uma única etapa de cinco minutos. O estudo concentrou-se principalmente em amostras com baciloscopia positiva e alta concentração bacteriana; pesquisas adicionais podem ser necessárias para determinar a sensibilidade em pacientes com baciloscopia negativa. Um pequeno subconjunto de amostras envolvendo um gene específico, o inhA, apresentou menor sensibilidade.

Em uma terceira linha de pesquisa, um teste molecular altamente sensível detectou DNA do Mycobacterium tuberculosis em uma proporção surpreendente de pacientes hospitalizados nos Estados Unidos, de acordo com um estudo publicado na Nature Communications. Utilizando um ensaio ultrassensível capaz de detectar a TB em níveis abaixo dos limites das ferramentas diagnósticas padrão, uma equipe liderada por pesquisadores da Universidade de Boston testou um conjunto de 146 amostras respiratórias anônimas coletadas em dois hospitais de Boston entre maio e setembro de 2013 e 50 amostras de controle coletadas entre maio e julho de 2014. Eles também conduziram um estudo clínico longitudinal com 101 amostras coletadas entre fevereiro e junho de 2014. O ensaio Totally Optimized PCR TB detectou DNA da TB em 12,3% de um conjunto inicial de amostras, em comparação com 2% das amostras de controle. Na coorte de acompanhamento, 15,8% das amostras foram positivas. Uma taxa de incidência de 12% a 16% é muito superior ao esperado, dado o baixo número de casos de TB em Boston. Setenta e cinco por cento dos pacientes que testaram positivo para DNA da TB tinham 50 anos ou mais, o que está de acordo com os padrões dos EUA, onde a TB é mais comum em adultos mais velhos. Quatro pacientes jovens testaram positivo, três dos quais compartilhavam o diagnóstico de síndrome torácica aguda, uma complicação potencialmente fatal da doença falciforme. Os pesquisadores levantam a hipótese de que os resultados podem apontar para uma forma de TB anteriormente não reconhecida, chamada doença TB paucibacilar, na qual os níveis bacterianos são muito baixos para serem detectados por testes convencionais. Os achados podem ser evidência do "princípio do iceberg", no qual os casos diagnosticados representam a ponta visível enquanto muitos outros casos permanecem ocultos. Os autores observaram que os resultados precisam ser confirmados em estudos prospectivos maiores.