Avanços em Espectrometria de Massas: Metabolômica de Líquens, Otimização de Ensaios de CYP e Quantificação de Fármacos

Três estudos recentes destacam o uso crescente de técnicas analíticas baseadas em espectrometria de massas na pesquisa farmacêutica e biomédica. Um estudo envolveu o perfil fitoquímico abrangente de 39 espécies de líquens coletadas no leste da Polônia, utilizando HPLC-QTOF-MS/MS, combinado com análise quimiométrica e testes de atividade biológica. Após o processamento dos dados, um total de 91 compostos foi identificado, sendo os depsídeos e as depsidonas as classes químicas dominantes. Análises multivariadas (PCA e PLS-DA) revelaram padrões metabolômicos distintos entre as espécies e destacaram a relação entre a composição de metabólitos e a atividade biológica.

O potencial anti-inflamatório dos extratos de líquens foi avaliado em macrófagos estimulados por LPS, por meio da medição dos níveis de espécies reativas de oxigênio (ROS) intracelulares, óxido nítrico (NO) e atividade da ciclooxigenase-2 (COX-2). A maioria dos extratos reduziu significativamente os níveis de ROS, indicando um efeito antioxidante consistente. Em contraste, a modulação de NO e COX-2 foi mais variável e geralmente menos pronunciada. Análises quimiométricas sugeriram que múltiplos metabólitos contribuem para a atividade anti-inflamatória observada, com evidências de uma relação inversa entre a redução de ROS e a inibição de COX-2. Embora alguns compostos tenham sido associados a efeitos biológicos, os resultados indicam que esses efeitos provavelmente são impulsionados pelas interações complexas dentro dos extratos, e não pela ação de constituintes individuais. No geral, os líquens surgem como fontes promissoras de agentes anti-inflamatórios, atuando principalmente por mecanismos antioxidantes.

Em um segundo estudo, um método validado de LC-MS/MS foi desenvolvido seguindo as diretrizes da USFDA para a estimativa simultânea de Tramadol HCl e dexketoprofen trometamol em plasma de ratos, utilizando Tapentadol como padrão interno. Os analitos foram extraídos do plasma pela técnica de precipitação de proteínas com acetonitrila. A separação cromatográfica foi realizada em uma coluna Waters Symmetry Shield RP-18 (250 × 4,6 mm, 5 μm) com fase móvel isocrática de acetonitrila e ácido fórmico a 0,1% em água de grau HPLC (30:70 v/v) em fluxo de 1,0 mL/min, resultando em um tempo de corrida de 7 minutos. A detecção foi feita por ionização por electrospray, com transições de íons de m/z 222.3398 → 70.0307 para Tapentadol, m/z 264.4351 → 96.4527 para Tramadol HCl e m/z 376.4239 → 100.4520 para dexketoprofen trometamol. O método apresentou boa precisão, com recuperações médias de 92,79%–98,15% para Tramadol HCl e 91,78%–98,37% para dexketoprofen trometamol. Excelente linearidade foi obtida, com valores de r² de 0,99983 (22,5–900 ng/mL) e 0,99963 (7,5–300 ng/mL), respectivamente. Todos os parâmetros de validação atenderam aos critérios aceitáveis. O método é adequado para avaliar parâmetros farmacocinéticos que indicam eficácia e segurança do fármaco.

Uma terceira investigação examinou a força iônica dos tampões de incubação em ensaios de metabolismo de CYP. Os substratos de CYP foram incubados com microssomas de fígado humano fortificados com NADPH em soluções tampão contendo 20, 50 ou 100 mM de fosfato de potássio. O objetivo foi encontrar o nível adequado de fosfato de potássio para amostras testadas com os sistemas SCIEX 7500+, Echo® MS+ e ZenoTOF 7600, mantendo a atividade de CYP. Ao comparar os valores de meia-vida entre as condições de tampão, o estudo descobriu parâmetros de ensaio ideais que mantêm a atividade de CYP ao mesmo tempo em que proporcionam a maior sensibilidade analítica para o ensaio. Comparações de meia-vida entre o sistema Echo® MS+ e a LC-MS convencional para analitos como bupropion, dextromethorphan e diclofenaco mostraram viés percentual variando de -16,82% a 15,19% entre as concentrações de tampão avaliadas.