Avances en espectrometría de masas: metabolómica de líquenes, optimización de ensayos CYP y cuantificación de fármacos

Tres estudios recientes destacan el creciente uso de técnicas analíticas basadas en espectrometría de masas en la investigación farmacéutica y biomédica. Un estudio implicó el perfilado fitoquímico exhaustivo de 39 especies de líquenes recolectadas en el este de Polonia mediante HPLC-QTOF-MS/MS, combinado con análisis quimiométricos y pruebas de actividad biológica. Tras el procesamiento de datos, se identificaron un total de 91 compuestos, siendo las depsidas y depsidonas las clases químicas dominantes. Los análisis multivariantes (PCA y PLS-DA) revelaron patrones metabolómicos distintos entre las especies y resaltaron la relación entre la composición de metabolitos y la actividad biológica.

El potencial antiinflamatorio de los extractos de líquenes se evaluó en macrófagos estimulados con LPS mediante la medición de los niveles intracelulares de especies reactivas de oxígeno (ROS), óxido nítrico (NO) y la actividad de la ciclooxigenasa-2 (COX-2). La mayoría de los extractos redujeron significativamente los niveles de ROS, lo que indica un efecto antioxidante constante. Por el contrario, la modulación de NO y COX-2 fue más variable y, en general, menos pronunciada. Los análisis quimiométricos sugirieron que múltiples metabolitos contribuyen a la actividad antiinflamatoria observada, con evidencia de una relación inversa entre la reducción de ROS y la inhibición de COX-2. Aunque se encontró que algunos compuestos estaban asociados con efectos biológicos, los resultados indican que es probable que estos efectos estén impulsados por las interacciones complejas dentro de los extractos más que por la acción de constituyentes individuales. En general, los líquenes emergen como fuentes prometedoras de agentes antiinflamatorios, actuando principalmente a través de mecanismos antioxidantes.

En un segundo estudio, se desarrolló un método validado de LC-MS/MS siguiendo las directrices de la USFDA para la estimación simultánea de clorhidrato de tramadol y trometamol de dexketoprofeno en plasma de ratas, utilizando tapentadol como estándar interno. Los analitos se extrajeron del plasma mediante la técnica de precipitación de proteínas con acetonitrilo. La separación cromatográfica se logró en una columna Waters Symmetry Shield RP-18 (250 × 4,6 mm, 5 μm) con una fase móvil isocrática de acetonitrilo y ácido fórmico al 0,1 % en agua de grado HPLC (30:70 v/v) a un caudal de 1,0 mL/min, lo que dio un tiempo de ejecución de 7 minutos. La detección se realizó mediante ionización por electrospray con transiciones de iones de m/z 222,3398 → 70,0307 para tapentadol, m/z 264,4351 → 96,4527 para clorhidrato de tramadol y m/z 376,4239 → 100,4520 para trometamol de dexketoprofeno. El método mostró una buena precisión, con recuperaciones medias del 92,79 %–98,15 % para clorhidrato de tramadol y del 91,78 %–98,37 % para trometamol de dexketoprofeno. Se obtuvo una linealidad excelente, con valores de r2 de 0,99983 (22,5–900 ng/mL) y 0,99963 (7,5–300 ng/mL), respectivamente. Todos los parámetros de validación cumplieron criterios aceptables. El método es adecuado para evaluar parámetros farmacocinéticos que indican la eficacia y seguridad del fármaco.

Una tercera investigación examinó la fuerza iónica de los tampones de incubación en ensayos de metabolismo de CYP. Los sustratos de CYP se incubaron con microsomas hepáticos humanos fortificados con NADPH en soluciones tampón que contenían 20, 50 o 100 mM de fosfato de potasio. El objetivo era encontrar el nivel adecuado de fosfato de potasio para las muestras analizadas con el sistema SCIEX 7500+, el sistema Echo® MS+ y el sistema ZenoTOF 7600, manteniendo al mismo tiempo la actividad de CYP. Al comparar los valores de vida media en diferentes condiciones de tampón, el estudio descubrió parámetros de ensayo ideales que mantienen la actividad de CYP y proporcionan la mayor sensibilidad analítica para el ensayo. Las comparaciones de la vida media entre el sistema Echo® MS+ y la LC-MS convencional para analitos como bupropión, dextrometorfano y diclofenaco mostraron un sesgo porcentual que oscilaba entre -16,82 % y 15,19 % en las concentraciones de tampón evaluadas.